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黄芪的薄层色谱荧光鉴别-【新闻】

发布时间:2021-04-08 13:22:40 阅读: 来源:橡胶地垫厂家

黄芪的薄层色谱荧光鉴别

为提高中药制剂研制水平和质量控制水平,制剂中的每一味药都应有专属性强的鉴别法。黄芪甲苷为黄芪的特征成分,因此黄芪甲苷的薄层鉴别成了黄芪及其制剂中黄芪的代表,《中国药典》1995,2000年版也正式给予法定,至今为止的科研报道、新药研制、医院制剂也都采用此方法。但在实际工作中我们发现,此法用于鉴别单味或药味少的复方制剂中的黄芪较合适,当用于药味较多的制剂时,存在明显的不足,表现为:黄芪甲苷的极性较大,在正相薄层色谱图中的Rf值较小,出现在斑点密集区,且与前后相邻成分不易分开;为使斑点可见,点样量一般要达拖尾,而拖尾却严重影响斑点的识别;制剂中黄芪以外的药味造成的背景干扰很大,特别是阴性对照品在此位置往往有斑点出现,干扰结果的正确判断。

我们通过大量实验发现一种以2个相对固定的荧光斑点构成的薄层色谱图,用此图谱鉴别黄芪以及含黄芪的复方制剂时,几乎不受其他药物的干扰,也不受点样量多而致的样品拖尾干扰,更适合于黄芪及有关制剂的鉴别。

1、实验材料

1.1 对照药材 内蒙黄芪(购自中国药品生物制品检定所)。

1.2 生药 黄芪(购自山西省太原市,为黄芪的冷冻干燥品,产地山西,由我室主任中药师俞明霞鉴定为内蒙黄芪Astragalus membrancus(Fisch.)bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao。膜夹黄芪 A.membrancus(南京中医药大学中康公司中药指纹图谱实验室提供)。

1.3 制剂 功血颗粒(本院制剂室生产,处方中有地黄、阿胶、女贞子、枸杞子、黄芪等11味中药);中汇糖脉康颗粒(中汇制药公司,批号200322,处方有黄芪、地黄、丹参、牛膝、麦冬、黄精等药物);补中益气口服液(三九湖州药业有限公司,批号990812,处方有黄芪、党参、甘草、白术、当归、升麻、柴胡、陈皮)。

1.4 试剂 正丁醇、碳酸氢钠、无水硫酸钠(CR级)。

1.5 薄层板 硅胶G预制板(青岛海洋化工厂)。

1.6 仪器 254nm紫外灯。

2、实验方法

2.1 内蒙黄芪和膜夹黄芪的荧光图谱

取内蒙黄芪、膜夹黄芪各2g,加水50mL回流提取1h,滤过,滤液用水饱和的正丁醇萃取(35mL×3),合并3次萃取液,以5%碳酸氢钠溶液洗涤(20mL×2),继续以水洗涤(20mL×2),无水硫酸钠吸收多余水分,回收正丁醇至干,残渣用1mL甲醇溶解,分别作为供试品液。取对照药材2g,按上述方法制备对照药材溶液。吸取上述溶液各5 uL,分别点于同一块硅胶G薄层板上,以甲醇-氯仿-水(15:65:5)的下层液为展开剂,上行展开,取出,晾干,置UV254 nm紫外灯下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相对应的位置上,有2个相同的蓝色荧光斑点,其中蒙古黄芪的荧光斑点中,Rf值小为0.35的斑点较大且明亮,Rf值大为0.76的斑点较小;膜夹黄芪中2个斑点情况正好相反。如放置365nm下观察,上述荧光斑点仍然存在,但背景的荧光较强,斑点不甚清晰。

2.2制剂中黄芪的荧光色谱图

称取功血颗粒10g、中汇糖脉颗粒10g,加热水溶解,滤过,另取补中益气口服液30mL,分别按2.1项中的方法制得各制剂供试液。分别称取上述各制剂中除了黄芪外的药味制得它们的阴性对照品,并接同法制得阴性对照品溶液。分别吸取各制剂供试液。该制剂的阴性对照液、黄芪对照液点于同一块硅胶G预制板上,按2.1项中的方法展开,置UV254 nm 紫外灯下检视。各制剂的供试品色谱中,在与黄芪对照品色谱相对应的位置上,都有2个相同的蓝色萤光斑点,它们的阴性对照品对此均无干扰。从色谱结果可以辨定,制剂中黄芪均为内蒙黄芪。

3、结果和讨论

3.1 黄芪的2个荧光斑点中,内蒙黄芪中的Rf值较小斑点较大且明亮,膜夹黄芪中的正好相反,2个斑点的Rf值及它们之间的距离较适中,周围没有其他干扰斑点,构成了黄芪特有的、比较固定的色谱图。

3.2 黄芪荧光斑点清晰、干扰小的原风在于:正丁醇提取了样品中的中等极性部分;正丁醇提取液又经5%的碳酸氢钠洗涤,除去了大量含酚羟基的成分,如黄酮和其他酚性干扰物质;再经过特定的展开剂展开、分离;254nm紫外灯下观察,薄层板上原本存在的许多其他物质在此波长下不发荧光,一般不影响黄芪的荧光斑点观察,即使点样量很大,引起严重拖尾,也不干扰荧光斑点的观察,因而此图谱具有很好的重现性、专属性,能对结果作出很明确的判断;365nm下由于荧光物质太多,无法区别黄芪与其他干扰物质,不适合本品的观察。

3.3 本法重视性好、专属性强,如作为黄芪及其制剂中黄芪的特征鉴别,可提高中药制剂质量控制水平。

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